酮体β-羟基丁酸减轻炎症状态下血管内皮细胞线粒体氧化应激的机制研究

  目的  探讨酮体β-羟基丁酸（β-OHB）对炎症状态下人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）线粒体氧化应激的调控作用及机制。  方法  用脂多糖（LPS）和三磷酸腺苷（ATP）诱导巨噬细胞释放促炎因子，收集培养基上清液作为条件培养基（macrophage-conditioned medium, MCM）培养HUVECs。研究共设置7组HUVECs细胞。①对照组：正常培养的HUVECs；②MCM组：MCM培养的HUVECs；③～⑦组为加入不同试剂的HUVECs共培养组，包括：③MCM+β-OHB组，④MCM+N-乙酰半胱氨酸（NAC）组，⑤MCM+β-OHB+NAC组，⑥MCM+β-OHB+组蛋白去乙酰化酶激动剂ITSA1组，⑦MCM+β-OHB+组蛋白去乙酰化酶抑制剂Entinostat组。MitoSOX免疫荧光染色分析线粒体超氧化物水平，实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测抗氧化基因mRNA表达，并以Seahorse线粒体能量分析仪测定线粒体有氧呼吸能力。  结果  与对照组相比，MCM培养的HUVECs细胞线粒体超氧化物生成明显增多，而β-OHB处理可明显抑制线粒体超氧化物生成，并伴随抗氧化基因mRNA表达水平上升，以及线粒体基础耗氧率和呼吸储备能力的显著提高。NAC处理并未进一步提高β-OHB对线粒体功能的保护作用。并且，ITSA1处理可完全取消β-OHB的抗氧化和线粒体保护作用，而Entinostat处理后上述作用仍然维持。  结论  酮体β-OHB通过抑制组蛋白去乙酰化酶活性，激活抗氧化通路，减轻血管内皮细胞的线粒体氧化应激。